在神經(jīng)科學(xué)、藥理學(xué)和生理學(xué)研究中，大小鼠微透析技術(shù)是一種重要的活體取樣方法，能夠?qū)崟r(shí)獲取細(xì)胞外液中的小分子物質(zhì)（如神經(jīng)遞質(zhì)、代謝產(chǎn)物等）。而大小鼠微透析探針作為該技術(shù)的核心工具，其正確使用直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的質(zhì)量和動(dòng)物福利。以下是詳細(xì)的操作指南與注意事項(xiàng)：

　　一、大小鼠微透析探針實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備與檢查

　　1. 系統(tǒng)完整性驗(yàn)證

　　開(kāi)箱后首先確認(rèn)包裝內(nèi)的組件是否齊全：包括探針本體、連接管路、灌流液容器、恒流泵及固定裝置等。特別要檢查探針膜區(qū)的通透性——輕輕吹氣測(cè)試是否有均勻氣流排出，確保無(wú)堵塞或破損。若發(fā)現(xiàn)膜表面有劃痕或裂紋，應(yīng)立即更換新探針以避免樣本污染。

　　2. 灌流液配制與脫氣處理

　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的人工腦脊液（aCSF）配方，并加入必需的添加劑（如K通道阻滯劑）。配制完成后需進(jìn)行超聲波脫氣至少15分鐘，去除溶解氧以外的氣體氣泡。未充分脫氣的灌流液可能導(dǎo)致流量不穩(wěn)定甚至斷流，嚴(yán)重影響回收率。建議使用在線過(guò)濾器進(jìn)一步凈化液體，防止微粒阻塞微孔道。

　　3. 參數(shù)預(yù)校準(zhǔn)

　　將恒流泵設(shè)置為低流速模式（通常為1-5μL/min），觀察實(shí)際輸出是否符合理論值。可通過(guò)稱重法驗(yàn)證單位時(shí)間內(nèi)收集到的液體重量來(lái)校正泵速誤差。同時(shí)調(diào)整壓力傳感器閾值報(bào)警功能，以便及時(shí)察覺(jué)管路異常情況。

　　二、大小鼠微透析探針植入手術(shù)關(guān)鍵技巧

　　1.麻醉深度把控

　　采用腹腔注射戊巴比*鈉的方式維持麻醉狀態(tài)，期間持續(xù)監(jiān)測(cè)角膜反射和腳趾夾捏反應(yīng)以確保鎮(zhèn)痛效果適度。過(guò)深抑制自主呼吸會(huì)干擾生理指標(biāo)；過(guò)淺則引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致皮質(zhì)醇升高，兩者均會(huì)影響目標(biāo)區(qū)域的代謝水平。推薦配合體溫控制系統(tǒng)保持直腸溫度在37±0.5℃范圍內(nèi)。

　　2.立體定位精度控制

　　利用腦立體定位儀時(shí)，務(wù)必反復(fù)核對(duì)Bregma點(diǎn)作為原點(diǎn)的坐標(biāo)體系。對(duì)于紋狀體靶向?qū)嶒?yàn)，典型坐標(biāo)約為AP+0.8mm, ML±3.0mm, DV-4.5mm（相對(duì)于顱骨表面）。鉆孔過(guò)程中使用低速鉆頭配合生理鹽水冷卻降溫，避免熱損傷周圍組織。暴露硬腦膜后勿強(qiáng)行剝離，可用細(xì)小彎鑷輕柔分開(kāi)以減少出血風(fēng)險(xiǎn)。

　　3.緩速插入策略

　　手持顯微操作臂以約1mm/s的速度勻速下插探針，遇到阻力時(shí)立即暫停并回退少許重新調(diào)整角度。切忌暴力推進(jìn)造成機(jī)械性創(chuàng)傷！當(dāng)探針尖*抵達(dá)預(yù)定深度后，用牙科水泥或?qū)Ｓ脢A持器穩(wěn)固于顱骨螺絲上，防止因頭部移動(dòng)導(dǎo)致的微位移。此時(shí)可通過(guò)顯微鏡確認(rèn)膜區(qū)全浸沒(méi)于目標(biāo)腦區(qū)。

　　三、大小鼠微透析探針灌流平衡期管理

　　1.基線穩(wěn)定化流程

　　啟動(dòng)恒流泵后先以較高流速?zèng)_洗系統(tǒng)30分鐘，排除空氣泡和雜質(zhì)顆粒。隨后降至實(shí)驗(yàn)設(shè)定流速繼續(xù)灌流90-120分鐘，直至基線信號(hào)波動(dòng)小于5%。在此期間定期采集空白樣本檢測(cè)背景噪音水平，必要時(shí)延長(zhǎng)平衡時(shí)間直至信號(hào)平穩(wěn)。注意避免頻繁開(kāi)關(guān)泵影響流體動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性。

　　2.實(shí)時(shí)監(jiān)控要點(diǎn)

　　密切關(guān)注入口壓力變化曲線，突然升高可能提示探針堵塞；持續(xù)下降則暗示漏液發(fā)生。同步記錄動(dòng)物生命體征參數(shù)（心率、血氧飽和度），確保生理狀態(tài)穩(wěn)定。若使用多通道系統(tǒng)，不同顏色的染料可幫助區(qū)分各通路是否正常工作。